Криптоспоридиоз (Cryptosporidiosis) — протозойное, остро или подостро протекающее заболевание молодняка крупного рогатого скота, вызываемое кокцидиями семейства Cryptosporidiidae, проявляющееся поражением желудочно-кишечного тракта с нарушением его пищеварительной и всасывательной функций, органов дыхания и иммунной системы.
Возбудители. Криптоспоридии относятся к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, отряду Coccidiida, роду Criptosporidium. У млекопитающих, в том числе у телят, паразитируют два вида: Criptosporidium parvum (Tizzer, 1912) и С. muris (Tizzer, 1910).
Ооцисты криптоспоридии имеют округлую или овальную форму. Отличительными особенностями криптоспоридий от других кокцидий являются: очень мелкий размер ооцист (4,5. 6,3 х 73,6. 5,4 мкм) и эндогенных стадий; два типа ооцист (с толстыми и тонкими стенками); отсутствие митохондрий и микропор; аутоинвазия хозяина ооцистами; экстрацитоплазматическая локализация эндогенных стадий; очень высокая устойчивость к противококцидийным препаратам. В ооцисте имеются четыре свободнолежащих спорозоита и остаточное тело.
Ооцисты криптоспоридий имеют округлую форму, полупрозрачные с почти бесцветной оболочкой. Внутри в виде темной точки видно остаточное тельце, вокруг которого располагаются спорозоиты.
Биология развития. Криптоспоридии развиваются в организме одного хозяина по схеме, сходной со схемой жизненного цикла эймерий. Весь цикл развития криптоспоридий — от попадания в организм живот- ного-хозяина до формирования ооцист и начала их выделения — занимает 3. 7 дней с продолжением до полного выздоровления животного, обычно 9. 14 дней. Криптоспоридии проходят три стадии развития: спорогонию, мерогонию и гаметогонию.
Спорогония проходит в организме хозяина, и во внешнюю среду выделяются спорулированные ооцисты. При попадании в организм восприимчивого животного с кормом или водой оболочка ооцисты разрушается в кишечнике и спорозоиты продвигаются к эпителиальным клеткам, но не внедряются в них, а задерживаются в зоне микроворсинок — щеточной кайме слизистой оболочки. Паразит локализуется на границе эпителиальной клетки, где превращается в трофозоит. Трофозоиты увеличиваются в размерах, их ядро многократно делится, образуются ме- ронты, которые могут быть двух типов. Меронты первого типа распадаются на 6. 8 мерозоитов, каждый из которых способен снова образовывать меронты. Так в организме накапливаются паразиты из них, а также из трофозоитов формируются меронты второго типа. Они образуют 4 мерозоита, из которых развиваются половые клетки — макро- и микрога- монты. Макрогамонты превращаются в макрогаметы. У микрогамонтов ядра делятся на 16 дочерних ядер, которые дают начало безжгутиковым микрогаметам. Макро- и микрогаметы копулируют с образованием зиготы, которая покрывается оболочкой и превращается в ооцисту. При этом образуются два вида ооцист: тонкостенные и толстостенные. Последние, попадая во внешнюю среду, становятся высокоустойчивыми к воздействию неблагоприятных факторов и могут сохраняться до 16 месяцев. Ооцисты с тонкими оболочками выделяются из организма не полностью. Часть их может оставаться в животном и снова заражать его, т. е. приводить к аутоинвазии (рис. 3.9-1).
Эпизоотологические данные. Кроме телят болеют ягнята и козлята. Хозяевами могут быть также грызуны и человек. Криптоспоридиоз широко распространен на всех континентах и диагностируется в любое время года. Пик инвазии чаще всего приходится на конец зимы и начало весны, когда новорожденные телята находятся в состоянии иммунодефицита. Телята заражаются в первые дни после рождения и могут быть носителями криптоспоридии до 8-месячного возраста.
Источник заражения — больные животные и носители. Фактор передачи возбудителя — контаминированные ооцистами криптоспоридий корма, вода, предметы ухода, оборудование и т.д. Персонал может служить пассивным переносчиком через загрязненную одежду и обувь. Переносчиками могут быть другие виды животных (особенно грызуны), а также насекомые. Взрослые животные перестают быть носителями ооцист и не играют большой роли в эпизоотологии криптоспоридиоза.
На фермах может постоянно сохраняться высокая обсемененность ооцистами криптоспоридии помещений, территории, оборудования. Это объясняется высокой устойчивостью ооцист к воздействию дезинвази- рующих средств, температурным колебанием, а также большой репродуктивной способностью паразитов. Так, в 1 г фекалий может содержаться свыше 1 млн ооцист.
Рис. 3.9-1. Цикл развития криптоспоридий (по Atkins et al., 1998) |13]
Патогенез. При криптоспоридиозе прежде всего поражается слизистая оболочка кишечника. Из-за поражения участков кишечника, которое может быть сплошным на всем его протяжении, уменьшается всасывательная поверхность слизистой оболочки. Следствие этого развивается диарея. Инвазия сопровождается инфильтрацией макрофагами, нейтрофилами и эозинофилами подслизистого слоя. Отмечаются набухание, недоразвитие и атрофия ворсинок. Они теряют бокаловидные клетки и слипаются друг с другом. Снижается содержание сахарозы, мальтозы в микроворсинках, значительно снижается ферментативная активность кишечника. Не исключается и патогенное влияние продуктов метаболизма криптоспоридии в процессе их эндогенного развития.
Иммунитет. Иммунитет при криптоспоридиозе изучен недостаточно. Переболевшие животные, как правило, приобретают иммунитет и повторно не болеют. Этим объясняется отсутствие носительства у взрослого поголовья крупного рогатого скота. Снижение иммунного статуса хозяина создает благоприятные предпосылки для развития. У таких животных заболевание протекает тяжело, наблюдают высокую смертность.
Клинические признаки. Инкубационный период длится 3. 7 суток. Заболевание протекает по-разному. Это зависит от интенсивности инвазии, иммунного состояния организма хозяина, возраста, породы, от условий содержания и кормления. Телята заболевают обычно на
6.. .9 день после рождения и болеют 7. 14 дней.
Различают три степени тяжести болезни: легкую, среднюю и тяжелую. При легкой наблюдается вялость, снижение аппетита, слабая диарея (фекалии жидкой или полужидкой консистенции без заметной слизи). Болезнь протекает несколько дней с благоприятным исходом.
При средней тяжести отмечается слабость, снижение аппетита, повышение жажды, устойчивая диарея. Фекалии жидкие, водянистые с наличием слизи. Животное тяжело встает, задняя поверхность бедер и хвост загрязнены фекалиями. Продолжается до 5. 8 дней, при лечении и хорошем уходе наступает выздоровление.
Тяжелая форма проявляется более выраженными симптомами. Животные залеживаются, аппетит отсутствует, жажда, диарея, фекалии жидкие со слизью, иногда с наличием крови или ее следов. Наступает обезвоживание организма. Глаза тусклые, запавшие, их слизистые оболочки обычно сухие с синюшным оттенком. Отмечается повышение температуры в начале болезни до 40,0. 40,5 °С и понижение ее к концу с неблагоприятным прогнозом. Наблюдается тахикардия, мышечная дрожь, отсутствие тактильной чувствительности. При надавливании в области нижней стенки живота отмечается болезненная реакция животного. При исследовании крови обнаруживается уменьшение количества общего белка и гипогаммаглобулинемия, снижение глюкозы в сыворотке крови больных телят, снижение количества лейкоцитов и гемоглобина при одновременном увеличении числа эритроцитов и эо- зинофилов. При отсутствии своевременного (с появлением признаков) лечения, болезнь нередко осложняется воспалением легких и становится затяжной, оканчиваясь летально.
Возможно бессимптомное переболевание. У животных не отмечены случаи хронического течения криптоспоридиоза. Они или выздоравливают, или погибают.
Возможны осложнения инвазии эймериями, Е. coli, клостридиями, сальмонеллами. Считают, что при заражении только криптоспоридиями животные не погибают.
Патологоанатомические изменения. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника гиперемирована и покрыта слизью. Отмечают гиперплазию эпителия крипт. Эти изменения наблюдают в задней трети тонкой кишки и, как правило, их не находят в двенадцатиперстной и начальном отрезке тощей кишок.
Диагностика. Диагноз ставят комплексно с учетом эпизоотологиче- ских данных, клинических и патологоанатомических признаков и подтверждают их результатами лабораторных исследований.
Для анализов берут фекалии от больных животных и исследуют различными методами. От трупов берут содержимое подвздошной кишки и фекалии из прямой кишки. Наиболее распространенный метод диагностики — метод нативного мазка. Из фекалий делают тонкий мазок, высушивают, фиксируют метиловым спиртом или жидкостью Никифорова, после чего окрашивают карбол-фуксином по Цилю-Нильсену. Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в красный цвет. Внутри их можно видеть четыре спорозоита. Сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленый цвет. Мазки можно красить по Романовскому-Гимза. В этом случае ооцисты криптоспоридий имеют вид неокрашенных или слабо- окрашенных округлых образований диаметром 3. 7 мкм. Внутри ооцист иногда можно видеть бледно-голубые удлиненные, слегка изогнутые спорозоиты с красноватыми гранулами внутри. Спорозоиты расположены по периферии ооцисты, оставляя ее центральную часть пустой.
Для увеличения в исследуемом материале концентрации ооцист используют флотационные и флотационно-центрифужные методы (Вреза, 1957; Никитина, 2003). Из материала, взятого паразитологической петлей с пленки поверхностного натяжения, в пробирке готовят мазок, фиксируют его и красят.
Лечение. Эффективных средств специфичной терапии для лечения животных, больных криптоспоридиозом, пока не найдено. Показано применение диетических кормов, иммуностимуляторов, симптоматических средств и препаратов, восстанавливающих водно-солевой обмен.
При диарее телят рекомендуют полимиксин в дозе 30. 40 тыс. ЕД с фу- разолидоном из расчета 6. 10 мг/кг в течение 5. 6 дней. Получены положительные результаты при применении сульфадимезина, ампролиу- ма, химкокцида, особенно при одновременном назначении иммуностимуляторов.
Меры борьбы и профилактика. В первую очередь необходимо создать оптимальные условия кормления и содержания стельных коров с целью получения телят, обладающих высоким иммунным статусом.
Следует тщательно убирать помещения животноводческих ферм, систематически дезинвазировать клетки и загоны, в которых содержат телят. Для дезинвазии применяют 10%-ный раствор формалина и 5%- ный раствор аммиака. Губительно на криптоспоридий действует высушивание и обжигание.
Больных животных изолируют и лечат. Обслуживающий персонал ферм, особенно при возникновении желудочно-кишечных расстройств, систематически обследуют на наличие ооцист в фекалиях. Проводят санитарно-просветительную работу с работниками животноводства.
Криптоспоридиоз, невзирая на интригующее название (из греческого «крипто» — тайный, спрятанный), изучен достаточно хорошо. А вот единой универсальной схемы этого заболевания, от которого часто страдают телята, до сих пор нет. Но точно известно, что в лечебные схемы обязательно нужно включать пробиотики.
Криптоспоридиоз – протозойное антропозоонозное заболевание животных и людей, которое вызывают кокцидии рода Cryptosporidium. Криптоспоридии локализуются вне кишечных клеток и проявляют чрезвычайную стойкость к противопротозойным препаратам. Они поражают слизистую оболочку кишок, что приводит к их воспалению, снижению ферментативной активности, появлению изнурительной диареи (фекалии желто-оранжевые или серо-желтые), обезвоживанию, общей интоксикации, упадку сил. Механизм передачи возбудителя у криптоспоридиоза – выраженный фекально-оральный. Хозяевами криптоспоридий могут быть около 30 видов животных.
Диагностика криптоспоридиоза у телят
Криптоспоридии поражают эпителий внутренних органов, в частности, кишечника и органов дыхания. Эндогенные стадии криптоспоридий размножаются в эпителиальных клетках кишечника, вызывая воспалительные процессы разной сложности. У КРС паразитирует четыре вида криптоспоридий: Cryptosporidium parvum, C. andersoni, С. Ryanae, C. Bovis.
Животные заражаются алиментарным путем, через заглатывание ооцист с водой, молоком, кормом.
Симптомы криптоспоридиоза у телят
Клинически проявляется у телят 3-30-суточного возраста, пик заболеваемости приходится на 7-15 сутки. У больных животных отмечают ухудшение аппетита, угнетенное состояние, жажду, снижение среднесуточных приростов, потерю массы тела, отставание в росте, диарею со слизью, иногда с примесью крови.
При тяжелом протекании криптоспоридиоза телята лежат, встают тяжело, плохо реагируют на внешние раздражители, глаза тусклые, слизистые оболочки суховатые, синюшные. Наблюдается тахикардия, мышечная дрожь, потеря тактильной чувствительности. При отсутствии своевременного лечения заболевание усложняется пневмонией, что часто приводит к гибели.
Важно! Криптоспоридиоз телят необходимо дифференцировать от эймериоза.
Диагностика криптоспоридиоза телят проводится с учетом клинических признаков, эпизоотологических данных, паталогоанатомических изменений. Окончательный диагноз устанавливается обнаружением ооцист возбудителя в фекалиях (не позже 4-6 суток после отбора).
Самым эффективным методом копроскопической диагностики криптоспоридиоза КРС является метод окрашивания мазков по Кестеру. Данный метод оказался на 29,6% эффективней сравнительно с методом Циля-Нильсена, и на 48,3% метода Гимзы.
Изменения биохимических показателей крови при криптоспоридиозе
При криптоспоридиозе существенные изменения биохимических показателей крови животных отмечали на 35 сутки жизни.
В сыворотке крови отмечалось понижение общего белка на 22,6% на фоне уменьшения содержания альбуминов на 14,65%, что свидетельствует о серьезных нарушениях в организме больных животных. Концентрация глюкозы в сыворотке крови понижалась на 30% из-за ее потерь на поддержание энергетических потребностей организма.
Понижение содержания холестерола на 28,15% указывает на величину липопротеидной фракции. Отмечалось увеличение содержания общего билирубина на 75,5%, что свидетельствует о развитии существенных нарушений обмена веществ. Снижение уровня каротина (в пределах 2,5-4,6 мкмоль/л) объясняется слабым потреблением и усвояемостью кормов. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови близок к нижней допустимой границе – 2,78 ммоль/л, фосфора – 1,94 ммоль/л, что обусловлено незначительным влиянием криптоспоридий на фосфорно-кальциевое питание животных.
Профилактика и лечение криптоспоридиоза у телят
Криптоспоридии насчитывают около 20 видов, и признанные этиологическим фактором диареи более чем у 20 видов животных, а также людей.
Кокцидии Cryptosporidium oocystes паразитируют в микроворсинчастом крае кишечного эпителия, вызывая клинические формы инфекции от острого водянистого поноса до тяжелых гастроэнтеритов. У животных с иммунными нарушениями может развиться тяжелая персистирующая инвазия.
Самой уязвимой является тощая кишка, однако криптоспоридий находят и в глотке, желудке, пищеводе, двенадцатиперстной кишке, желчном пузыре, подвздошной, ободовой, прямой кишке.
Инфицированное животное является источником инвазии на протяжении всего периода заболевания и в последующие несколько недель после выздоровления. Профилактика криптоспоридиоза состоит в создании оптимальных условий кормления и содержания сухостойных коров и телят, тщательной и регулярной уборке помещений, вывозе навоза.
Дезинвазию помещений проводят 5%-м раствором аммиака и 10%-м раствором формалина.
Важно! На криптоспоридии пагубно влияют высушивание и обжигание открытым огнем в помещении, где содержат животных.
Специалисты разных стран мира испробовали более сотни фармакологических средств, в состав которых входили кокцидиостатики, антибиотики, антигельминтики, сульфаниламидные, нитрофурановые и другие препараты. Однако до сих пор не найдено достаточно эффективных лекарств против криптоспоридиоза, которые могли бы полностью избавить животных от криптоспоридий и эффективно действовали в эндогенной стадии развития ооцист этих паразитов.
Лечение криптоспоридиоза КРС состоит в назначении симптоматической и патогенетической терапии, диетическом кормлении, льняном отваре, препаратах, восстанавливающих водно-минеральный обмен. Сульфадимезин 0,1 г/кг м.т. два раза в день на протяжении шести дней, а также в сочетании с фумаровой кислотой в дозе 0,1 г/кг один раз в день на протяжение семи дней; норсульфазол в дозе 0,05 г/кг три раза в день на протяжение трех дней; химкокцид в сочетании с полимиксином, фармазином, аскорбиновой кислотой и разными изотоническими растворами два раза в день до полного клинического выздоровления.
Использование пробиотиков при криптоспоридиозе
Единственным безусловно эффективным подходом к лечению криптоспоридиоза является устранение основных нарушений иммунитета.
Исследования проводили на 18 телятах возрастом 2-35 суток, инвазированных криптоспоридиями. Первой опытной группе давали толтарокс (KRKA, Словения) 3 мл/10 кг м.т. дважды, двое суток подряд. Второй опытной группе давали толтарокс в той же дозе и прибиотик иммунобактерин-D («Укрзооветпромпостач»), который содержит пробиотические бактерии Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis в дозе 10 грамм в сутки (по 5 грамм два раза в сутки) с молоком, двое суток подряд.
На 28-е сутки животные второй группы полностью освободились от паразитов, то есть конечный результат действия препаратов доказал 100% эффективность толтарокса с иммунобактерином-D.
По схеме «кокцидиостатик+пробиотик» лечение сиптомокомплекса диареи криптоспоридиозного происхождения у телят предусматривает введение иммунабактерина-D четыре раза в сутки (первый раз с утренним кормлением, с теплой водой или молоком) и кокцидиостатиков диклакокс или байкокс согласно инструкции. Или бровитакокцид в дозе 1,5 г/10 кг м.т. на протяжении 5-10 суток.
Криптоспоридиоз – остро или подостро протекающее заболевание молодняка животных, вызываемое простейшими из рода Cryptosporidium, семейства Cryptosporidiidae, отряда Coccidiida, класса Coccidea, типа Sporozoa.
Криптоспоридиивыявлены у различных видов млекопитающих, птиц, рептилий, рыб, а также у человека. Криптоспоридиоз относится к категории зоонозов. У млекопитающих, включая человека, криптоспоридии локализуются обычно в кишечнике, но известны случаи и внекишечной локализации. Так, у поросят криптоспоридий находили в конъюнктиве глаз, в трахее, у обезьян-резусов и жеребят – в протоках поджелудочной железы.
У млекопитающих криптоспоридиоз вызывают два вида – C. parvum и C.muris. Криптоспоридии не имеют узкой видовой специфичности в отношении хозяев. Ооцистами от телят успешно заражали ягнят, козлят, крыс, мышей в возрасте от 3 до 5 дней (Heine, Boch, 1981). Криптоспоридиоз был диагностирован у 12 людей, имевших прямой контакт с телятами в период вспышки у них криптоспоридиоза (болезнь проявлялась диареей и спазмами в области живота) (Reese, 1982).
Морфология. C. parvum: Ооцисты округлой формы, с тонкой оболочкой, размером 5,4 – 6 мкм (рис. 22). Содержат 4 свободных спорозоита. Паразит локализуется в тонкомкишчнике и дыхательных путях. Развитие проходит на поверхности эпителиальных клеток.C.muris: Ооцисты размером 6 – 8 мкм и паразит находится в слизистой оболочке желудка. Речь идёт, пожалуй, о единственном паразите, который паразитирует в желудке хищных. Он считается Малопатогенным видом
Рис. 22.Ооциста Cryptosporidium parvum.
Диагностика.Комплексная, с учетом эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомического и лабораторных исследований.
Эпизоотология. Особенно часто криптоспоридиоз как ведущий фактор диареи отмечается у телят в возрасте 6-20 дней. Однако все авторы отмечают, что по достижению телятами возраста 30 дней, случаи криптоспоридиоза становятся спорадическими.
Болезнь развивается чаще всего у ослабленных животных с иммунодефицитом, а также на фермах, неблагополучных по стрептококкозам, эшерихиозу, вирусным инфекциям. Экстенсивность инвазии (ЭИ) телят может достигать 6-68%, летальность – 17-50% .
Болезнь проявляется во все сезоны года. J. Fiedler (1985) наблюдал максимальное число случаев в зимнее-весенний период, минимальное – в августе. А.В Лабинов и В.Ф. Никитин (2001) приводят другие данные для хозяйств Московской области: апрель, май и август – 66%; сентябрь – 86% (при содержании в помещении; при содержании в летнем лагере – 33%). Они отмечают, что содержание телят летом на открытом воздухе под навесом снижает ЭИ более чем в 2 раза.
Обострение эпизоотической обстановки по криптоспоридиозу в последнее время связано, вероятно, с вводом технологии содержания, при которой животные концентрируются на небольшой площади, а животноводческие помещения эксплуатируются с повышенной нагрузкой. Способствует быстрому распространению болезни в хозяйствах выделение с фекалиями больных телят уже спорулированных (инвазионных) ооцист, значительная устойчивость их во внешней среде (сохраняют жизнеспособность до 16 месяцев при температурных колебаниях, при дезинфекции обычными средствами), а также высокая интенсивность выделения (в 1г фекалий больного теленка может содержаться свыше 1 млн. ооцист).
Заразившиеся в первые дни жизни телята остаются носителями криптоспоридий до 8-ми месячного возраста. Источниками инвазии иногда могут служить взрослые коровы, обслуживающий персонал, кошки, собаки, насекомые. Источником заражения являются корм, вода, инвентарь и т.п., контаминированные возбудителями.
Для обеззараживания телятников рекомендуется применять 10% раствор формалина или 5% раствор аммиака, которые вызывают гибель ооцист за 18 ч. Также необходимо вести борьбу с крысами как с основными переносчиками и распространителями инвазии на фермах.
Криптоспоридиоз у человека – это СПИД-ассоциируемая инвазия, которая трансформирует ВИЧ-инфекцию в СПИД и нередко приводит к гибели таких больных. Если у иммунокомпетентных лиц криптоспоридиоз можно охарактеризовать как острое непродолжительное кишечное заболевание, то у лиц с иммунодефицитом – это тяжелое диарейное заболевание с хроническим течением, нередко заканчивающееся при отсутствии адекватной терапии летальным исходом.
Симптомы болезни. Первые признаки болезни наблюдают с первых дней жизни телят, далее болезнь прогрессирует, усиливается профузный понос, угнетение, отказ от корма, слабость. Фекалии животных желтые или бело-серые, водянистые вследствие нарушения всасывания, с гнилостным запахом – вследствие нарушений ферментного пищеварения. Часто в них видны прожилки крови и кусочки слизистой оболочки. При развитии болезни тенезмы могут прекращаться, фекалии вытекают самопроизвольно. Температура тела в течение болезни обычно не повышена, а при тяжелом течении – понижена.
В крови наблюдается эозинофилия, лейкопения, лимфоцитопения., снижение общего сывороточного белка и гамма-глобулинов, глюкозы.
Подострое течение, обусловленное аутоинвазией тонкостенными ооцистами, остающимися в кишечнике, носит длительный характер со стертыми клиническими признаками и приводит к задержке роста, недобору привесов и в конечном счете – к снижению продуктивных и репродуктивных качеств животных.
Патологоанатомические изменения.У больных животных в пораженном кишечнике наблюдается сплошное или очаговое катаральное воспаление слизистой оболочки, ее набухание и истончение, гиперемия, отложения фибрина и слизи, десквамация эпителия, кровоизлияния. На гистологических препаратах, приготовленных из срезов тонкого кишечника больных телят, можно видеть укорачивание, уплощение ворсинок и атрофию микроворсинок, у которых отсутствует или сильно редуцировангликокаликс. Цитоплазма энтероцитоввакуолизирована, наблюдается интра- и экстрацеллюлярный отек, инфильтрация слизистого и подслизистого слоев кишечной стенки макрофагами и нейтрофилами, диапедезные кровоизлияния из поврежденных сосудов. Кишечные железы сморщены и заполнены клеточным детритом.
Брыжеечные лимфоузлы увеличены, местами покрасневшие, на разрезе — сочные. Наблюдается прямая зависимость выраженности патологоанатомических изменений от степени поражения клеток криптоспоридиями.
Следует подчеркнуть, что похожие изменения могут быть вызваны и другими причинами поражения кишечника; патогенез собственно криптоспоридиоза мало изучен.
Лабораторная диагностика.Диагноз на криптоспоридиоз устанавливают на основании лабораторных исследований фекалий (прижизненно) и патологического материала (посмертно) с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.
Для исследования в лабораторию направляют: свежие пробы фекалий массой около 10 г из прямой кишки, взятые от 10-20 подозреваемых в заболевании животных, пробы исследуют в день отбора; пробы патматериала от трупов — соскобы и мазки-отпечатки из пораженных мест кишечника или участки тонкого кишечника, которые необходимо исследовать не позднее 6 ч после гибели животного.
Исследование фекалий.Приготовление мазка из свежих фекалий. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю фекалий, разбавляют каплей физиологического раствора, распределяют тонким слоем (без нажима!). Полученный мазок высушивают при комнатной температуре.
Применение флотационных методов. Пробу фекалий массой 3 г помещают в стакан объемом 50 мл, заливают небольшим количеством насыщенного раствора хлорида натрия (400 г на 1 литр горячей воды, плотность раствора 1,18 г/мл) или сульфата цинка (400 г на 1 л воды, плотность раствора 1,24 г/мл) или смесью Павласека (хлорид цинка – 220 г, хлорид натрия – 210 г, вода – 800 мл). Тщательно размешивают палочкой, добавляют раствор до краев стакана, фильтруют через сито и отстаивают в течение 15-20 мин. Затем металлической петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, делают тонкий мазок и высушивают на воздухе.
Применение центрифугирования в сочетании с флотацией. Пробу фекалий массой 3 г помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 15 мл воды, размешивают, фильтруют через металлическое сито, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 1-2 мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют один из флотационных растворов, указанных выше, перемешивают и снова центрифугируют при том же режиме. Металлической петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, делают тонкий мазок и высушивают на воздухе.
Фиксация мазков. На высушенный мазок наносят несколько капель этилового (метилового) спирта и фиксируют в течение 10-15 минут до полного испарения спирта. Затем мазок окрашивают одним из следующих способов.
Окраска мазков по Цилю-Нильсену.Для приготовления карболового фуксинаЦиля в ступку вносят фуксин основной – 2г, добавляют 2-3 капли глицерина, растирают, тщательно перемешивают при постепенном добавлении спирта этилового 96°- 12 мл, карболовой кислоты – 5 г и воды дистиллированной – 100мл. Раствор сливают в склянку с плотной пробкой, помещают на сутки в термостат при температуре 37°С и фильтруют через бумажный фильтр. Зафиксированные мазки окрашивают в течение 20 мин в растворе карболового фуксина, промывают в проточной воде, слегка высушивают и наносят на стекло 7-10 % раствор серной кислоты на 30-60 секунд для обесцвечивания. Затем промывают в проточной воде и докрашивают мазок 5% раствором малахитового зеленого в течение 1-2 минут.
Окраска мазков сафранином по Кюстеру.Готовят отдельно 3% раствор сафранина и 5,6% раствор КОН в дистиллированной воде. Перед применением готовят рабочий раствор: берут 5 капель свежеприготовленного раствора сафранина и смешивают с 1,5 мл раствора КОН.
Фиксированный мазок окрашивают рабочим раствором сафранина в течение 5 мин, промывают водой, обесцвечивают 0,5% раствором серной кислоты в течение 15 секунд, промывают водой, докрашивают 5% раствором малахитового зеленого на 10% этиловом спирте в течение 10-15 секунд, промывают водой, высушивают на воздухе.
Окраска мазков по Романовскому-Гимзе.Рабочий раствор краски готовят из расчета 1-3 капли готовой краски на 1 мл воды (рН=7,0-7,2). На один препарат используют 3-4 мл разведенной краски.
Окрашивают фиксированные мазки в течение 20-30 мин, после чего их промывают дистиллированной водой и высушивают.
Оценка результатов окраски. Высушенные мазки просматривают под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива.
— по Цилю-Нильсену – кислотоустойчивые ооцистыкриптоспоридий округлой формы , 4-5 мкм, ярко-красного цвета различных оттенков; они хорошо различимы на общем зеленом фоне мазка.
— по Кюстеру – ооцисты окрашиваются в бледно-розовый цвет.
— по Романовскому-Гимзе – округлые ооцисты не окрашиваются или окрашиваются слабо, внутри них по периферии заметны спорозоиты удлиненной формы, слегка изогнутые, бледно-голубого цвета с красной гранулой.
Оценка интенсивности инвазии в среднем по 10 полям зрения микроскопа:
+ — низкая (1-3 ооцисты);
++ — средняя (до 25 ооцист);
+++ — высокая (более 25 ооцист).
Исследование нативных препаратов фекалий. Применяется метод И. Павласека (1990) с применением глицерина (1). В каплю фекалий добавляют несколько капель глицерина, при этом ооцистыкриптоспоридий приобретают слегка розоватый цвет и становятся хорошо различимы. В ооцистах четко выявляются спорозоиты. Другие простейшие и частицы не обладают свойством менять свой цвет под влиянием глицерина. Следует отметить, что такая окраска ооцисткриптоспоридий может исчезнуть через 30-40 мин после приготовления нативного препарата. В связи с этим, необходимо исследовать только свежеприготовленные препараты. Исследование проводят под увеличением микроскопа 40х10.
Количественный метод диагностики криптоспоридиоза. Методика основана на способности эфира, при добавлении эфира во взвесь фекалий, просветлять взвесь, захватывая частицы детрита и жира, поднимать их на поверхность при центрифугировании. К пробе фекалий (1 мл) добавляют 5 мл 2% раствора кальцинированной соды и тщательно перемешивают, затем смесь фильтруют через металлическое сито в центрифужную пробирку, добавляют воду, доводя объем взвеси до 10 мл. Взвесь центрифугируют в течение 3 мин при 2500-3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 6-7 мл 2% раствора кальцинированной соды и 1,5-2 мл этилового эфира. Пробирку закрывают пробкой, осторожно перемешивают и центрифугируют 10 минут при 250-500 об/мин. После центрифугирования образовавшуюся в пробирке надосадочную жидкость отсасывают пипеткой до метки 1 мл. Осадок тщательно перемешивают и пипеткой из гемометра Сали быстро набирают 0,01 мл взвеси, выдувают на предметное стекло и готовят мазок. Полученный мазок высушивают, фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену. Подсчет ооцисткриптоспоридий ведут по всей поверхности мазка под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива. Полученное количество ооцист умножают на 1000 и получают количество ооцист в 1 г фекалий. Для удобства подсчета ооцисткриптоспоридий мы рекомендуем применять сетку Акбаева.
Посмертная диагностика.
Посмертный диагноз на криптоспоридиоз представляет определенные сложности: в связи с мелкими размерами ооцист, их внешней схожестью на мазках-отпечатках с каплями жира, эритроцитами и др., а также быстрым аутолизом. Обязательное условие – недопущение замораживания и оттаивания проб патматериала. Мазки-отпечатки и соскобы фиксируют этанолом и окрашивают по Цилю-Нильсену, затем просматривают под большим увеличением микроскопа, с использованием иммерсионного объектива.
Дифференциальный диагноз. В исследуемых мазках ооцисты криптоспоридий следует отличать от других возбудителей, вызывающих энтериты молодняка. Ооцисты эймерий в мазках – различной формы, значительно крупнее криптоспоридий, внутри бывают различимы 4 спороцисты, содержащие по 2 спорозоита.
В связи с достаточно неспецифичными клиническими проявлениями энтерита криптоспоридиозной этиологии, его следует отличать от энтеритов инфекционной природы, определять ведущую роль возбудителей в их возникновении. Л. А. Небайкиной (2001) предложен способ ориентировочного выявления ведущего возбудителя энтерита в окрашенных по Грамму мазках-отпечатках со слизистой оболочки кишечника телят (таблица 12).
Таблица 12. Дифференциальная диагностика криптоспоридиоза по мазкам-отпечаткам со слизистой оболочки кишечника.
| Вид в поле зрения микроскопа при исследовании мазка-отпечатка | Ориентировочный диагноз |
| Почти чистая культура Грамм-отрицательных, мелких, толстых палочек с закругленными концами, расположенных группами | Колибактериоз |
| Преобладают Грамм-положительные, толстые с прямоугольными концами бациллы, расположенные одиночно, парами, короткими цепочками | Энтеротоксемия, вызванная Clostridium perfringens |
| Преобладают нейтрофильные клетки с микробами | Сальмонеллез |
| Разная микрофлора, трудно выделить преобладающую | Вирусные инфекции |
| Преобладают неокрасившиеся по Грамму образования, по величине и форме напоминающие эритроциты, часть из них имеет светлый ободок | Криптоспоридиоз |
Лечение.До настоящего времени остается открытым вопрос специфического терапии криптоспоридиоза из-за отсутствия эффективных этиотропных препаратов, обладающих выраженным избирательным действием на криптоспоридий, хотя в ряде экспериментальных исследований были получены положительные результаты. Следовательно, при лечении данного заболевания основную роль играет патогенетическая терапия. Как зарубежными, так и отечественными исследователями рекомендовано большое количество схем лечения и применения различных препаратов для лечения криптоспоридиоза животных.
Анализ исследований работ авторов, показывает, что лечение животных при криптоспоридиозе необходимо проводить в следующих направлениях: 1. Восстановление нарушенных функции работы пищеварительного тракта. 2. Восстановление нарушенного водно-электролитного равновесия и ускорение компенсаторных процессов. 3. Восстановление иммунного статуса (иммунокоррекцию). 4. Профилактику вторичных (секундарных) инфекций и инвазий. 5. Поддерживающая терапия.
Таблица 13. Препараты для лечения криптоспоридиоза телят
| Наименование препарата | Концентрация, дозы | Условия применения |
| Полимиксин + с фуразолидон | 30-40 тыс. ЕД + 6-10 мг/кг массы тела | в течение 5-6 дней |
| Сульфадимезин | в дозе телятам 1—2 г | внутрь |
| Ампролиум |
| Телята, овцы и козы: |
| Профилактика : 1 г на 60 кг веса тела |
| Лечение: 1 г на 30 кг массы тела |
Применение тех или иных лечебных препаратов для проведения патогенетической терапии в каждом конкретном случае определяется тяжестью течения заболевания, их доступностью и экономической оправданностью их использования (табл. 13).
Профилактика.Ооцисты криптоспоридий высоко резистентны к большинству дезинфектантов, используемых в домашних условиях, лечебно-профилактических учреждениях, лабораториях и системах очистки воды, включая 3% раствор гипохлорита натрия, многие препараты йода и хлора и 5% раствор формалина.
Дата добавления: 2016-04-11 ; просмотров: 2285 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ
